細(xì)胞凍存是細(xì)胞生存的重(zhòng)要要領(lǐng)之一。使用凍存技能將細(xì)胞置於-196~C液氮(dàn)中低(dī)溫生存 ，可以使細(xì)胞臨時(shí)離開(kāi)生長(zhǎng)狀態而將其細(xì)胞特(tè)性生存起來，如(rú)許在必要的時(shí)間(jiān)再蘇醒細(xì)胞用於實行。並且適度地生存肯定(dìng)量(liàng)的細(xì)胞，可以防(fáng)備因(yīn)正在造(zào)就(jiù)的細(xì)胞被污染或其他不測變亂(luàn)而使細(xì)胞丟種(zhǒng) ，起到了細(xì)胞保種(zhǒng)的作用。除(chú)此之外，還可以使用細(xì)胞凍存的情(qíng)勢來購置 、寄贈、互換和運送某些細(xì)胞 。細(xì)胞凍存時(shí)向造(zào)就(jiù)基中參加掩護劑(jì)——終(zhōng)濃度5%~15%的甘油(yóu)或二甲基亞碸(DMSO)，可使溶液冰點低(dī)落 ，加之在遲鈍凍結(jié)條件(jiàn)下，細(xì)胞內(nèi)水分(fèn)透(tòu)出 ，淘汰了冰晶形成，從而制止細(xì)胞毀傷 。尺度冷凍速率開(kāi)始為-1到-2℃/min ，當(dāng)溫度低(dī)於-25℃時(shí)可加快(kuài)，到-80℃之後可直接投入液氮(dàn)內(nèi)(-196℃) 。
　　
　　現在常(cháng)用的掩護劑(jì)為二甲亞碸(DMSO)和甘油(yóu)，它們(men)對細(xì)胞無毒(dú)性 ，分(fèn)子量(liàng)小 ，溶解度大 ，易(yì)穿透(tòu)細(xì)胞。
　　
　　實行步調
　　
　　1.消化細(xì)胞 ，將細(xì)胞懸液網絡至(zhì)離心管中。
　　
　　2.1000rpm離心10分(fèn)鐘，棄上清液。
　　
　　3.沈澱加含掩護液的造(zào)就(jiù) ，計數，調解至(zhì)5106/ml左右 。
　　
　　4.將懸液分(fèn)至(zhì)凍存管中，每管1ml 。
　　
　　5.將凍存管口封嚴 。如(rú)用安瓿瓶則火焰封口，封口肯定(dìng)要嚴 ，不然蘇醒時(shí)易(yì)出現爆裂。
　　
　　6.貼上標籤，寫明細(xì)胞種(zhǒng)類，凍存日期 。凍存管外拴一金屬重(zhòng)物和一細(xì)繩(shéng) 。
　　
　　7.按(àn)下列(liè)次序(xù)降溫 ：室溫→4℃(20分(fèn)鐘)→冰箱冷凍室(30分(fèn)鐘)→低(dī)溫冰箱(-30℃1小時(shí))→氣(qì)態氮(dàn)(30分(fèn)鐘)→液氮(dàn) 。
　　
　　細(xì)致：操縱時(shí)應警惕，以免(miǎn)液氮(dàn)凍傷。液氮(dàn)定(dìng)期查抄 ，隨(suí)時(shí)增補 ，不克不及(jí)揮發潔淨 ，一樣通常(cháng)30立升的液氮(dàn)能用1～1.5月 。